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【測(cè)定原理】 本試劑盒采用間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA法檢測(cè)尿樣和組織等樣本中的萊克多巴胺，在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原，利用抗原與抗體的特異性免疫化學(xué)反應(yīng)的原理來(lái)進(jìn)行，樣本中的克倫特羅和微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原競(jìng)爭(zhēng)標(biāo)記有辣根過(guò)氧化酶的抗萊克多巴胺抗體，通過(guò)洗滌后，用TMB底物顯色，樣品中的萊克多巴胺含量與樣品的吸光度值呈反比，與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出萊克多巴胺含量。 【試劑盒技術(shù)指標(biāo)】 規(guī) 格：96孔/盒 靈 敏 度： 0.1ppb 檢測(cè)時(shí)間： 45min 樣本檢測(cè)下限： 尿 樣 ………………………………… 0.1ppb 組 織（處理法一）…………………… 0.4ppb 肉樣本（處理法二）…………………… 0.1ppb 肝樣本（處理法二）…………………… 0.2ppb 飼 料 …… …………………………… 1ppb 交叉反應(yīng)率： 萊克多巴胺（Ractopamine）……………… 100% 克倫特羅（Clenbuterol）………………… <0.1% 沙丁胺醇（Salbutamol ）………………… <0.1% 多巴酚丁胺（dobutamine）……………… <0.1% 樣本回收率： 尿 樣 ……………………… 95%±10% 組 織 ……………………… 85%±15% 飼 料 ……………………… 85%±15% 【試劑盒組成】 1、 微量測(cè)試孔：1×96孔板（12條×8孔） 2、 （Clenbuterol標(biāo)準(zhǔn)溶液X6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3、 酶標(biāo)記抗體工作液 10ml………………綠色帽 4、 底物A液 7ml ……………………白色帽 5、 底物B液 7ml ……………………黑色帽 6、 終 止 液 7ml ……………………黃色帽 7、 20X濃縮洗滌液40 ml ………………透明帽 【 所用儀器、試劑】 具備的儀器：微孔酶標(biāo)儀、氮?dú)獯蹈裳b置、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、恒溫箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管 微量移液器：?jiǎn)蔚?0?l-200?l、100?l-1000?l、多道 250?l 試 劑： 乙腈、甲醇、正己烷、無(wú)水硫酸鈉 【樣本前處理步驟】 樣本處理前須知 處理任何樣本時(shí)，都必須注意： （a）實(shí)驗(yàn)中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時(shí)要更換吸頭。 （c）實(shí)驗(yàn)之前須檢查各種實(shí)驗(yàn)器具是否干凈，必要時(shí)可對(duì)實(shí)驗(yàn)器具進(jìn)行清潔，以避免污染干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 （a）尿樣本的處理方法 取20?l清亮尿樣直接測(cè)定（如果尿樣渾濁一定要過(guò)濾或離心10min，4000r/min，直至得到清亮尿樣），暫不使用的樣本應(yīng)冷凍保存。 樣本稀釋倍數(shù)：1 （b）組織樣本的處理方法一 1、 稱2±0.05g組織，加入6ml去離子水，充分振蕩2min，室溫4000r/min以上離心10min。 2、 取20?l上清液進(jìn)行分析。 樣本稀釋倍數(shù)：4 （c） 組織樣本（肌肉和肝臟）處理方法二 1、 稱取均勻后的組織樣本2±0.05g ，加入8ml乙腈溶液，充分振蕩2min。4000r/min以上，15℃離心10min； 2、 取上清液5ml，在56℃條件下氮?dú)饣蚩諝饬鞔抵镣耆稍铮?br/>肉樣本： 加入1ml 去離子水混合振蕩30s，取20?l用于分析。 肉樣本稀釋倍數(shù)：1 肝樣本： 加入2ml正己烷振蕩溶解，再加入1ml 去離子水混合振蕩30s，4000r/min以上，15℃離心5min，去除上層；取50?l下層 與50?l去離子水混勻；取20?l用于分析。 肝樣本稀釋倍數(shù)：2 （d）飼料樣本 1. 稱1.0±0.05g研碎的飼料樣品，加入10ml甲醇，再加入5g無(wú)水硫酸鈉，放振蕩器上振蕩2min；15℃ 4000r/min以上離心10min； 2. 吸出離心后的上清液1ml，于56℃氮?dú)獯蹈桑? ml 去離子水溶解干燥的殘留物，再加入1mL正己烷混合30s ；15℃ 4000r/min以上離心5min。 3. 取20?l下層進(jìn)行分析。 樣本稀釋倍數(shù)：10 【酶標(biāo)免疫分析程序】 測(cè)定前應(yīng)須知： 1、 使用之前將所有試劑和需用板條的溫度回升至室溫（20-25℃）。 2、 使用之后立即將所有試劑放回2-8℃。 3、 在ELISA分析中的再現(xiàn)性，很大程度上取決于洗板的一致性，正確的洗板操作是ELISA測(cè)定程序中的要點(diǎn)。 4、 在所有恒溫孵育過(guò)程中，避免光線照射，用蓋板膜封住微孔板。 操作步驟： 1、 將所需試劑從4℃冷藏環(huán)境中取出，置于室溫（20-25℃）平衡30min以上, 注意每種液體試劑使用前均須搖勻。 2、 取出需要數(shù)量的微孔板及框架，將不用的微孔板放入自封袋，保存于2-8℃不要冷凍。 3、 編號(hào)：將樣本和標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)應(yīng)微孔按序編號(hào)，每個(gè)樣本和標(biāo)準(zhǔn)品做2孔平行，并記錄標(biāo)準(zhǔn)孔和樣本孔所在的位置。 4、 加標(biāo)準(zhǔn)品/樣本20?l/孔到各自的微孔中，然后加酶標(biāo)記抗體80?l/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻，25℃環(huán)境中反應(yīng)30min。 5、 小心揭開(kāi)蓋板膜，將孔內(nèi)液體甩干，用去離子水250?l/孔充分洗滌4-5次，每次間隔15-30秒，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。 6、 顯色：每孔加入底物A液50?l，再加底物B液50?l，輕輕振蕩混勻25℃環(huán)境避光顯色15min。 7、 測(cè)定：每孔加入終止液50?l，輕輕振蕩混勻，設(shè)定酶標(biāo)儀于450nm處 （建議用雙波長(zhǎng)450/630nm，檢測(cè)在5min內(nèi)讀完數(shù)據(jù)）測(cè)定每孔OD值。 【結(jié)果判定】 結(jié)果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含萊克多巴胺量成負(fù)相關(guān)。 1、用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。例如樣本1的吸光度值為0.311，樣本2的吸光度值為0.715，標(biāo)準(zhǔn)品吸光度值分別是： 0ppb為1.642；0.1ppb為1.200；0.3ppb為0.780；0.9ppb為0.454； 2.7ppb為0.236；8.1ppb為0.142。則樣本1的濃度范圍是0.9ppb-2.7ppb，樣本2的濃度范圍是0.3ppb-0.9ppb。乘以其對(duì)應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺的實(shí)際濃度。 2、定量分析 （1）百分吸光率的計(jì)算，標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光度值的平均值（雙孔）除以第一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)（0標(biāo)準(zhǔn)）的吸光度值，再乘以100%，即 百分吸光度值（%）＝ B ×100% 【注意事項(xiàng)】 1、 使用前將所有試劑溫度回升至室溫20-25℃。試劑及標(biāo)本沒(méi)有回到室溫（20-25℃）會(huì)導(dǎo)致所有標(biāo)準(zhǔn)的OD值偏低。 2、 在洗板過(guò)程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況，則會(huì)伴隨著出現(xiàn)標(biāo)準(zhǔn)曲線不成線性，重復(fù)性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應(yīng)立即進(jìn)行下一步操作。 3、 混合要均勻，否則會(huì)出現(xiàn)重復(fù)性不好的現(xiàn)象。 4、 反應(yīng)終止液為2M硫酸，避免接觸皮膚。 5、 不要使用過(guò)了有效日期的試劑盒，稀釋或攙雜使用會(huì)引起靈敏度、OD值的變化。不要交換使用不同批號(hào)的盒中試劑。 6、 不用的微孔板放進(jìn)自封袋密封；標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)和無(wú)色的發(fā)色劑對(duì)光敏感，因此要避免直接暴露在光線下。 7、 顯色液若有任何顏色表明變質(zhì)，應(yīng)當(dāng)棄之。0標(biāo)準(zhǔn)的吸光度值小于0.5個(gè)單位（A450nm<0.5 ）時(shí)，表示試劑可能變質(zhì)。 8、 該試劑盒最佳反應(yīng)溫度為25℃，溫度過(guò)高或過(guò)低將導(dǎo)致檢測(cè)吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。 【儲(chǔ)存】 原包裝應(yīng)儲(chǔ)存于2～8℃冷藏，切勿冷凍。 【有效期】 有效期12個(gè)月;生產(chǎn)日期、有效期、生產(chǎn)批號(hào)見(jiàn)外包裝。 |
溫馨提示：不可用于臨床治療。 |
產(chǎn)品貨號(hào)：DR002
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