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酶抑制率法

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了由酶抑制率法測(cè)定蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速測(cè)定方法。

本標(biāo)準(zhǔn)適用于蔬菜中有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥殘留的快速測(cè)定。

2 原理

在一定條件下，有機(jī)磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥對(duì)膽堿酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率與農(nóng)藥的濃度呈正相關(guān)系。正常情況下，酶催化神經(jīng)傳導(dǎo)代謝產(chǎn)物

(乙酰膽堿)水解，其水解產(chǎn)物顯色劑反應(yīng)，產(chǎn)生黃色物質(zhì)，用分光光度計(jì)測(cè)定吸光度隨時(shí)間的變化值，計(jì)算出抑制率，通過(guò)抑制率可以判斷出樣品中是否含有有機(jī)磷或氨基甲酸酯類農(nóng)藥的存在。

3 試劑

3.1pH8.0 緩沖溶液：分別取 11.9 克無(wú)水磷酸氫二鉀與 3.2 克磷酸二氫鉀，用 1000毫升蒸餾水溶解。

3.2 顯色劑：分別取 160mg 二硫代二硝基苯甲酸（DTNB）和 15.6mg 碳酸氫納，用 20ml 緩沖溶液溶解，4°C 冰箱中保存。

3.3 底物：取 25.0mg 硫代乙酰膽堿，加 3.0ml 蒸餾水溶解，搖勻后置 4℃冰箱中保存?zhèn)溆茫４嫫诓怀^(guò)兩周。

3.4 乙酰膽堿酯酶：根據(jù)酶的活性情況，用緩沖溶液溶解，按 5.2 測(cè)定項(xiàng)操作，ΔA0 值應(yīng)控制在 0.3 以上。