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E+ TOP10 感受態(tài)細胞說明書

（Rev.A）

保存：-80℃保存，運輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-80℃保存至少6個月。

產(chǎn)品簡介：

本公司生產(chǎn)的E⁺ TOP10感受態(tài)細胞是采用大腸桿菌TOP10菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，具有無需繁瑣的冰浴、熱擊程序，簡單快速的進行質(zhì)粒DNA的轉化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測，轉化效率最高可達 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存3-5 個月轉化效率不發(fā)生改變。

基因型: F_mcrAΔ(mrr-hsd RMS-mcrBC)φ80lacZΔM15△lacⅩ74 recA1 deoRaraD139Δ(ara-leu)7697 galUgalKrpsL (StrR) endA1 nupG

特 點: 一種用于鋪制與培養(yǎng)質(zhì)粒平板和粘粒平板的重組缺陷的抑制型菌株。其φ80 lacZ△M15基因的產(chǎn)物可與 pUC 載體編碼的 β-半乳糖苷酶氨基端實現(xiàn) β 互補，可用于藍白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無菌條件的標準進行）

1.     將感受態(tài)細胞置于冰上融化，以下實驗以 100μl感受態(tài)細胞為例。

2.     向感受態(tài)細胞懸液中加入需轉化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過感受態(tài)細胞懸液體積的十分之一。

3.     室溫靜置5-10min。

4.     向離心管中加入 900μl 無菌無抗的 SOC（本試劑盒提供） 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時。目的是使質(zhì)粒上相關的抗性標記基因表達，使菌體復蘇。

5.     取適量已轉化的感受態(tài)細胞涂布含相應抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時或過夜培養(yǎng)。涂布用量可根據(jù)具體實驗來調(diào)整，如轉化的 DNA 總量較多，可取 100μl左右的轉化產(chǎn)物涂板；反之，如轉化的 DNA 總量較少，可取 200-300μl的轉化產(chǎn)物涂板。過多菌液可以抑制細菌生長。如果預計的克隆較少，可通過離心后吸除部分培養(yǎng)液，懸浮菌體后將其涂布于一個平板中。涂布剩余的菌液可 4℃保存，如果次日的轉化菌落數(shù)過少，可以將剩下的菌液再涂布新的平板。

注意事項：

1.     感受態(tài)細胞應保存在-80℃，不可反復凍融，否則其轉化效率將會降低。

2.     實驗過程中應嚴格無菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來影響。

3.     轉化時，轉化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當加入的外源 DNA 量過多或體積過大反而會降低轉化效率。轉化時 DNA 體積要小于感受態(tài)細胞體積的十分之一。

4.     為防止轉化實驗不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉化，將損失降到最低。