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JM110 感受態(tài)細(xì)胞說(shuō)明書(shū)

（Rev.A）

保存：-80℃保存，運(yùn)輸為干冰包裝。自收貨之日起液氮保存至少一年，-80℃保存至少6個(gè)月。

產(chǎn)品簡(jiǎn)介：

本公司生產(chǎn)的JM110感受態(tài)細(xì)胞是采用大腸桿菌JM110菌株經(jīng)特殊工藝制備得到，可用于DNA的化學(xué)轉(zhuǎn)化。使用pUC19 質(zhì)粒檢測(cè)，轉(zhuǎn)化效率最高可達(dá) 2×10⁷cfu/μg，-80℃保存3-5 個(gè)月轉(zhuǎn)化效率不發(fā)生改變。

基因型:recAsupE44endA1 hsdR17 gyrA96relA1 thi Δ(lac-proAB) F’[traD36 proAB+ lacIq lacZΔM15]

特 點(diǎn): 一種琥珀抑制型 F’重組缺陷菌株。支持 M13 噬菌體載體的生長(zhǎng)，對(duì)轉(zhuǎn)染的 DNA 有修飾作用，但 無(wú)限制作用。該菌株中的 F’帶有 lacZΔM15，后者使得與在 λZAP 中編碼的 β-半乳糖 苷酶氨基端進(jìn)行 α-互補(bǔ)， 可用于藍(lán)白斑篩選。

操作方法：（以下操作均按無(wú)菌條件的標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行）

1.     將感受態(tài)細(xì)胞置于冰上融化，以下實(shí)驗(yàn)以 100μl 感受態(tài)細(xì)胞為例。

2.     向感受態(tài)細(xì)胞懸液中加入需轉(zhuǎn)化的目的 DNA，注意目的 DNA 的體積不要超過(guò)感受態(tài)細(xì)胞懸液體積的十分之一，輕輕旋轉(zhuǎn)離心管以混勻內(nèi)容物，冰浴放置 30 分鐘。

3.     將離心管置于 42℃水浴中熱擊60-90秒，然后快速轉(zhuǎn)移到冰浴中放置 2-3 分鐘，注意不要搖動(dòng)離心管。

4.     向離心管中加入 900μl 無(wú)菌無(wú)抗的 SOC 或 LB 培養(yǎng)基，37℃ 180rpm 振蕩培養(yǎng) 30分鐘到1小時(shí)。目的是使質(zhì)粒上相關(guān)的抗性標(biāo)記基因表達(dá)，使菌體復(fù)蘇。

5.     取適量已轉(zhuǎn)化的感受態(tài)細(xì)胞涂布含相應(yīng)抗生素的 SOC 或 LB 平板，37℃倒置培養(yǎng) 12-16小時(shí)或過(guò)夜培養(yǎng)。涂布用量可根據(jù)具體實(shí)驗(yàn)來(lái)調(diào)整，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較多，可取200μl 左右的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板；反之，如轉(zhuǎn)化的 DNA 總量較少，可4℃，2500 g離心5min后，棄去上清約700μl，用剩余約200-300μl 的轉(zhuǎn)化產(chǎn)物涂板。過(guò)多菌液可以抑制細(xì)菌生長(zhǎng)。

注意事項(xiàng)：

1.     感受態(tài)細(xì)胞應(yīng)保存在-80℃，不可反復(fù)凍融，否則其轉(zhuǎn)化效率將會(huì)降低。

2.     實(shí)驗(yàn)過(guò)程中應(yīng)嚴(yán)格無(wú)菌操作，防止其它 DNA 或雜菌的污染，避免為以后的篩選、鑒定帶來(lái)影響。

3.     轉(zhuǎn)化時(shí)，轉(zhuǎn)化效率與外源 DNA 的濃度在一定范圍內(nèi)成正比，但當(dāng)加入的外源 DNA 量過(guò)多或體積過(guò)大反而會(huì)降低轉(zhuǎn)化效率。轉(zhuǎn)化時(shí) DNA 體積要小于感受態(tài)細(xì)胞體積的十分之一。

4.     轉(zhuǎn)化率的計(jì)算：轉(zhuǎn)化率＝產(chǎn)生菌落的總數(shù)/鋪板 DNA 總量。

5.     為防止轉(zhuǎn)化實(shí)驗(yàn)不成功，可以保留部分連接產(chǎn)物，以重新轉(zhuǎn)化，將損失降到最低。