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● 產(chǎn)品簡介：

Blue/Clear Native PAGE（BN/CN-PAGE）是一種從生物樣品（質(zhì)膜，胞漿等）中分離分子量10 kD-10000 kD 范圍的蛋白質(zhì)復(fù)合物的電泳技術(shù)。其原理是用溫和去污劑(如 DDM，digitonin)將蛋白復(fù)合體從細(xì)胞膜中以近似天然的狀態(tài)分離出來，Blue Native PAGE （BN-PAGE）是用考馬斯亮藍(lán) G-250 代替 SDS與蛋白結(jié)合而使其帶負(fù)電荷，根據(jù)蛋白分子量不同在 PAGE膠中得到分離；Clear Native PAGE（CN-PAGE）是電泳緩沖液中不加入任何染料，電泳中始終保持蛋白的天然電荷和活性狀態(tài)，然而，其蛋白的分辨率要低于Blue Native PAGE。另外，BN-PAGE由于考馬斯亮藍(lán)G-250存在，使蛋白都覆蓋上負(fù)電荷，可以分離堿性蛋白（pI＞7）；而CN-PAGE只適合于酸性蛋白（pI＜7）的分離。

本產(chǎn)品可以用于分離分子量在 10 kD-10000 kD 的蛋白復(fù)合體，樣品可以來于胞漿、細(xì)胞總裂解液、細(xì)胞膜、線粒體膜和葉綠體膜等。電泳后可直接用于考染、銀染、Western 雜交、SDS-PAGE電泳、蛋白純化、蛋白活性檢測等分析實驗，也可直接用于電洗脫制備蛋白。

● 運輸和貯存：

本產(chǎn)品常溫運輸；凝膠4-8℃貯存，不要冷凍；有效期6個月。

● 使用說明：

一. 樣品制備：

   該試劑盒不含樣品制備的相關(guān)試劑。

二. 電泳：

2.1 拆開預(yù)制膠包裝，將預(yù)制膠安裝在合適的電泳槽中。

2.2 準(zhǔn)備電泳緩沖液：

10×BN/CN電泳緩沖液稀釋10倍即配成1×BN/CN電泳緩沖液。

2.2.1 CN-PAGE電泳：

內(nèi)槽緩沖液（陰極緩沖液）和外槽緩沖液（陽極緩沖液）均直接使用1×BN/CN電泳緩沖液進行電泳。

2.2.2 BN-PAGE電泳：

外槽緩沖液使用1×BN/CN電泳緩沖液，內(nèi)槽緩沖液按照下表配制：

2.3準(zhǔn)備樣品：

2.3.1 CN-PAGE電泳：

2.3.2 BN-PAGE電泳：

樣品中G250終濃度為去垢劑終濃度的1/4。

例如樣品中DDM終濃度為1%，則需要G-250終濃度為0.25%。10 μl蛋白樣品中需要加5% G-250染料0.5 μl。

2.4電泳過程；

2.4.1 CN-PAGE電泳：

電泳內(nèi)外槽均使用1×BN/CN電泳緩沖液。在電泳槽的內(nèi)槽內(nèi)加入1×BN/CN電泳緩沖液(讓電泳緩沖液漫過加樣孔)，輕輕撥出預(yù)制膠梳子，用1ml吸頭沖洗加樣孔3次，隨后在電泳槽外槽加入適量的1×BN/CN電泳緩沖液，冰浴電泳，。

電泳條件（一板膠）

2.4.2 BN-PAGE電泳：

BN-PAGE電泳外槽使用1×BN/CN電泳緩沖液；內(nèi)槽開始電泳使用的是1×藍(lán)色陰極緩沖液，冰浴電泳，等待電泳指示前沿到達凝膠1/3處時，將電泳緩沖液更換為1×BN/CN電泳緩沖液，繼續(xù)后續(xù)電泳，因為過多染料會影響蛋白在凝膠中的遷移以及蛋白后續(xù)的轉(zhuǎn)膜實驗。

BN-PAGE電泳條件（一板膠）

三. 緩沖液配方：

3.1  10×BN/CN電泳緩沖液

終濃度  組份    500 ml

0.15 M  Bis-Tris   15.7 克

0.5 M  Tricine    44.8 克

超純水 定容至500 ml

徹底溶解，測定pH應(yīng)為7.0左右，不要調(diào)節(jié)pH。

3.2  0.4% G-250 染料（電泳用）

    100ml：0.4克考馬斯亮藍(lán)G-250，溶于100 ml超純水中，漩渦攪拌2-3小時，至染料徹底溶解，4℃貯存。

3.3  4×BN/CN 蛋白上樣緩沖液

組成：200mM Bis-Tris，40%甘油，200 mM NaCl，0.04%麗春紅S  pH7.0

3.4  5% G-250 染料（上樣用）

    組成： 5% G-250，500 mM 6-氨基己酸

    50 ml：稱取2.5克考馬斯亮藍(lán)G-250，3.28克6-氨基己酸溶于50 ml超純水中，漩渦攪拌2-3小時，至染料徹底溶解，4溫度貯存。