原理
本試劑盒采用競爭一步 ELISA 方法。樣品中的游離嘔吐毒素與酶標(biāo)記的嘔吐毒素競爭結(jié)合酶標(biāo)板微孔中固相化的嘔吐毒素特異性抗體，通過洗滌洗掉未結(jié)合的酶標(biāo)記嘔吐毒素，再通過酶的專一性顯色劑顯色根據(jù)顯色的深淺來判斷樣品中嘔吐毒素。根據(jù)競爭性原理，如果樣品中的游離嘔吐毒素量少，則酶標(biāo)記的嘔吐毒素結(jié)合的多，顯色深；反之，則顯色淺。檢測時設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)線，通過標(biāo)準(zhǔn)曲線測定樣品中嘔吐毒素的含量。
3 試劑盒組成
3.1嘔吐毒素酶標(biāo)板：96孔
3.2 嘔吐毒素標(biāo)準(zhǔn)品：6瓶（1ml/瓶），分別是：
標(biāo)準(zhǔn)品 | ① | ② | ③ | ④ | ⑤ | ⑥ |
濃度ng/ml | 0 | 1 | 3 | 9 | 27 | 81 |
3.3 嘔吐毒素酶結(jié)合物：1瓶（6ml）
3.4 濃縮洗滌液：1瓶（10×，50ml）
3.5 底物液A：1瓶（6ml）
3.6 底物液B：1瓶（6ml）
3.7 終止液：1瓶（6ml）
3.8 說明書：1份
3.9 質(zhì)檢報告：1份
4 需要而未提供的材料
4.1 酶標(biāo)儀（檢測波長450nm，參考波長630nm）
4.2 微量移液器
4.3 前處理所需試劑及相關(guān)儀器
5 貯存
5.1 試劑盒貯存于2-8℃，切勿冷凍
5.2 未用完的微孔板應(yīng)該密封干燥保存
5.3 該產(chǎn)品有效期為12個月
6 注意事項
6.1 使用試劑盒前請仔細(xì)閱讀說明書。
6.2 試劑盒使用前，將試劑恢復(fù)至室溫（20-25℃）。
6.3 不要使用過期試劑盒；不同批號試劑盒中的試劑不得混
用；不同標(biāo)準(zhǔn)品、樣品所用吸頭不能混用。
6.4 避免所有試劑接觸皮膚；混合試劑時應(yīng)避免起泡。
6.5使用過的玻璃容器及嘔吐毒素溶液接觸過的容器最好用 pH7 的高氯酸溶液（10%V/V）浸泡過夜。
7 試劑配制
7.1 洗滌工作液：
用去離子水將濃縮洗滌液按1：9體積進(jìn)行稀釋
例如：10ml洗滌工作液=1ml濃縮洗滌液+9ml去離子水
8 樣品處理程序
8.1 取 2g 有代表性的研磨粉末狀樣品，置于干凈離心管或廣口 瓶中，加入 10ml 去離子水，儀器振蕩或手動混勻 5 分鐘；
8.2 離心機 5000r/min離心 10 min，取上清液用去離子水按 1:3 稀釋； 例如：取 200μl 上清液加 600μl 去離子水，待檢。
8.3 用 HCl 或 NaOH 將 8.2 中待檢上清稀釋液調(diào) PH 至中性（若樣本還是渾濁，建議用8000r/min離心5min），按 50μl/孔進(jìn)行加樣分析檢測。
注意：樣品稀釋系數(shù)為 20；如果檢測值超出檢測范圍，請用去離子水將 8.3 中待檢上清稀釋液進(jìn)一步稀釋到合適的濃度，并調(diào)整樣品稀釋系數(shù)。
9 酶免分析步驟
9.1實驗準(zhǔn)備
9.1.1預(yù)先進(jìn)行編號，標(biāo)記標(biāo)準(zhǔn)品和樣品的位置，推薦進(jìn)行雙孔檢測（每次實驗都須做標(biāo)準(zhǔn)曲線）；
9.1.2使用前將所有試劑回升至室溫,取所需數(shù)量的微孔條，將多余板條用試劑盒提供的自封袋重新密封同時排除里面空氣，并立即放回2-8℃干燥保存。
9.2分析步驟
9.2.1在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入50?l各標(biāo)準(zhǔn)品溶液，在各樣品孔中加入50?l樣品溶液；
9.2.2在所有孔中加入50?l的嘔吐毒素酶標(biāo)記物溶液，輕微晃動反應(yīng)板使之徹底混勻，室溫下（20-25℃）溫浴40min；
9.2.3甩干孔中液體，用洗滌工作液（250ul/孔）洗滌微孔板4-5次，最后一次應(yīng)在吸水紙上拍打以完全除去孔中液體；
9.2.4洗滌程序完成后，立即用微量移液器在每個微孔中先加入50?l底物液A，再加 50?l底物液B，輕微晃動使之混勻；
9.2.5室溫下（20-25℃）溫浴15min（若顏色較淺可適當(dāng)延長至20min），每孔中加入50?l終止液，混勻，在450nm下檢測吸光度，結(jié)果在5min內(nèi)讀取。
10 結(jié)果計算
推薦使用快靈Log/Logit計算程序?qū)z測結(jié)果進(jìn)行計算，將檢測OD均值和標(biāo)準(zhǔn)品濃度輸入，即可自動獲得檢測結(jié)果，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品種嘔吐毒素濃度。
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